ICS 65.020.30 CCS B 43 41 河南省 地方 标准 DB41/T 2371—2022 猪冷冻精液生产技术规范 2022 - 12 - 22发布 2023 - 03 - 21实施 河南省市场 监督管理局 发布 DB41/T 2371 —2022 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 基本要求 ................................ ................................ ........... 2 5 稀释液配制 ................................ ................................ ......... 2 6 品质检查 ................................ ................................ ........... 2 7 精液冷冻 ................................ ................................ ........... 2 8 解冻检测与储存 ................................ ................................ ..... 3 9 冷冻质量要求 ................................ ................................ ....... 3 10 生产记录 ................................ ................................ .......... 4 11 运输 ................................ ................................ .............. 4 附录A（资料性） 猪冷冻精液生产仪器设备表 ................................ ............. 5 附录B（资料性） 冻精生产相关稀释液配制 ................................ ............... 6 附录C（资料性） 精液离心和稀释 ................................ ....................... 7 附录D（资料性） 猪冷冻精液生产记录样式 ................................ ............... 8 DB41/T 2371 —2022 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由河南省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位： 河南省农业科学院畜牧兽医研究所、河南省畜牧技术 推广总站 、河南精旺猪种改 良有限公司、牧原 食品股份有限公司、 漯河市畜牧工作站、 北京田园奥瑞生物科技有限公司 。 本文件主要起草人： 邢宝松、张家庆、王献 伟、卢清侠、原黎伟、葛位西、胡波、徐泽君、李彦朋、 吕玲燕、 蒋凡、申明、和 小娥、高彬文、蒋立云、任巧玲、陈俊峰、王璟、马 强、牛刚。 DB41/T 2371 —2022 1 猪冷冻精液生产技术规范 1 范围 本文件规定 了猪冷冻精液生产 与保存的基本要求 和技术要求 。包括精 液采集、 稀释液配制、 品质检 查、精液冷冻、 解冻品质检测、冻精包装 、储存及运输等内容。 本文件适用于猪 冷冻精液生产 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 4143 —2008 牛冷冻精液 GB/T 5458 —2012 液氮生物容器 GB/T 23238—2021 种猪常温精液 GB/T 25172—2020 猪常温精液生产与保存技术规范 GB/T 30396 —2013 牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输 NY/T 1234—2018 牛冷冻精液生产技术规程 NY/T 2077 —2011 种公猪站建设技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 种公猪 体型外貌和性能质量符合种 用标准要求的公猪 。 3.2 冻精细管 用于分装精液的 耐冻、无毒的聚氯乙烯复合塑料 细管。 3.3 冷冻精液 经特殊方法处理 经超低温冷冻并可 在液氮中（-196 ℃）长期保存 的精液。简称冻精。 3.4 细管冷冻精液 冷冻细管装入精液经液氮冷冻所形成的产品 。 3.5 细菌数 每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数 。 DB41/T 2371 —2022 2 3.6 活力 在37 ℃下呈直线前进运动的精子占总精子数的百分率 。 3.7 畸形率 畸形精子占总精子数的百分比。 4 基本要求 种公猪 4.1 应符合NY/T 2077 —2011中8.2.1的要求，其他应符合 GB/T 25172 —2020中4.1的要求。 原精液 4.2 应符合GB/T 25172—2020中5.2.2的要求。 操作环境 4.3 应符合NY/T 2077 —2011中7.3的要求。 采集量 4.4 地方品种≥50 mL,其他≥100 mL。 环境 4.5 精液采集室 、精液检测室的 环境条件应符合 NY/T 2077 —2011中7.4～7.5的要求。 仪器设备 4.6 4.6.1 仪器设备 的配置应满足猪冷冻精液生产的要求 (生产仪器设备见附录A)。 4.6.2 仪器设备运行正常，定期进行维护保养。 4.6.3 计量仪器（电子天平、恒温箱等） 、超纯水仪 、恒温热台、高压锅 等应定期校准或维护保养。 4.6.4 用品、 器具等应按 要求进行清洗和消毒 。清洗和消毒应符合 NY/T 1234—2018附录A中的规定。 5 稀释液配制 配制稀释液用水应为新鲜无菌的蒸馏水、重蒸水或超纯水 。稀释液所用化学试剂应为分析纯以上 5.1 级别，所用卵黄应来源于无特定病原体 鸡场的新鲜鸡蛋 ，配制方法见附录 B。稀释液配制需现用现配， 化学试剂需精确称量，配制稀释液灭菌容器需要进行标记 ，配制完成后需 在瓶上标记日期、 名称、保存 时间等。 使用商品稀释液应严格按照使用说明书的要求操作。 5.2 6 品质检查 精液品质检查应 按照GB/T 23238—2021附录A中的规定执行。 7 精液冷冻 DB41/T 2371 —2022 3 预稀释及平衡 7.1 经过质量评估合格的精液，用 等温预热且与精液温 度一致的预稀释液 （配制见附录 B）按照1:1～ 1:1.2比例稀释，稀释后的 精液于室温（ 25 ℃）静置1 h，转入17 ℃恒温冰箱， 平衡2 h～3 h。 离心 7.2 称量离心瓶重 w0（g），将离心瓶预冷至17 ℃，然后将17 ℃平衡好的精液装入离心瓶 进行离心 （17 ℃ 条件下， 800 g 离心 10 min），弃上清液，称重 w1（g）。 4℃平衡 7.3 用17 ℃预冷的冷藏保护液（Ⅰ液）（配制见附录 B）重悬精子 ,重悬后置于盛有 17 ℃水的500 mL 烧杯中，于 4 ℃冰箱或低温操作柜中缓慢降温至 4 ℃～5 ℃（2.5 h～3 h）。按1:1加入冷冻保护液（Ⅱ 液）（配制见附录 B）混匀， 在4 ℃下继续平衡 0.5 h～1 h,然后在低温操作柜中进行 灌装。 冷冻 7.4 7.4.1 程序冷冻 在灌装的同时开启程序冷冻仪，选定 冷冻曲线，待 冷冻仪温度稳定 在初始温度（4 ℃～5 ℃）后， 迅速将摆放好细管的托架放入冷冻室中，启动 冷冻程序。待冷冻曲线走完后，将托架迅速取出放入装有 液氮的泡沫箱中，液氮深度至少浸没所有细管。 7.4.2 熏蒸冷冻 将液氮倒入深度 50 cm以上的专用冷冻箱预冷 10 min,保持冷冻支架 上的细管在液氮面之上 2 cm,熏 蒸冷冻8 min, 最后将冷冻样品浸入液氮中。 7.4.3