ICS07.080 Q8499 团体标准 T/SZAS17—2020,T/LTIA08—2020,T/SAS0006—2020 严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 （SARS-CoV-2）核酸qRT-PCR方法检测技术 规程 TechnicalregulationofqRT-PCRfordetectingofsevereacuterespiratory syndromecoronavirus2(SARS-CoV-2)nucleicacid 2020-06-08发布 2020-07-08实施 深圳市标准化协会 深圳市生命科技产学研资联盟 上海市标准化协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SZAS17—2020,T/LTIA08—2020,T/SAS0006—2020 I目  次 前  言.............................................................................................................................................................II 1范围...................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件...............................................................................................................................................1 3术语、定义和缩略语.......................................................................................................................................1 4检测原理...........................................................................................................................................................2 5实验前准备.......................................................................................................................................................2 6样本采集、保存及运输...................................................................................................................................3 7检测流程...........................................................................................................................................................3 8结果判定...........................................................................................................................................................4 附录A（资料性附录）严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸qRT-PCR检测试 剂盒.......................................................................................................................................................................6 全国团体标准信息平台 T/SZAS17—2020,T/LTIA08—2020,T/SAS0006—2020 II前  言 本标准编写格式遵循了GB/T1.1-2009给出的规则编写。 本标准由深圳华大因源医药科技有限公司提出。 本标准由深圳市标准化协会、深圳市生命科技产学研资联盟、上海市标准化协会联合归口。 本标准主要起草单位：深圳华大因源医药科技有限公司、深圳华大基因股份有限公司、深圳海关动 植物检验检疫技术中心、深圳市药品检验研究院（深圳市医疗器械检测中心）、上海国际旅行卫生保健 中心、北京卓诚惠生生物科技股份有限公司、江苏宏微特斯医药科技有限公司、江苏奇天基因生物科技 有限公司、北京万泰生物药业股份有限公司、深圳市标准化协会、深圳市生命科技产学研资联盟、上海 市标准化协会、深圳华大基因科技有限公司、深圳华大智造科技有限公司，深圳华大生命科学研究院。 本标准主要起草人：申奥、宫艳萍、吴红龙、曾少灵、史卫军、陆晔、徐良、刘尧、林骏、张志强、 刘利成、应清界、叶祥忠、姜华艳、但丹、李陶莎、王荣昌、周颖、裘文阳、李倩一、吴昊、武庆超。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/SZAS17—2020,T/LTIA08—2020,T/SAS0006—2020 1严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸qRT-PCR 方法检测技术规程 1范围 本标准规定了严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）通用qRT-PCR方法(Taqman探针 法)的术语、定义和缩略语、检测原理、实验前准备、样本采集、保存及运输、检测流程和结果判定的 要求。 本标准适用于开展严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）qRT-PCR检测技术的机构， 通过对疑似感染患者样本中的SARS-CoV-2核酸进行检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T37875-2019核酸提取纯化试剂盒质量评价技术规范 《新冠病毒实验室检测技术指南（第二版）》（国卫办科教函202070号） 《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 3术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本文件。 3.1术语和定义 3.1.1 Ct值cyclethreshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 3.1.2 阳性对照品positivecontrol 由认可机构配制或试剂生产企业配制，有溯源性的含有特定浓度待测靶序列的物质。 3.1.3 空白对照品blankcontorl 由认可机构配制或试剂生产企业配制，有溯源性的不含有待测靶序列的物质，通常为无核酸酶水或 生理盐水。 3.2缩略语 全国团体标准信息平台 T/SZAS17—2020,T/LTIA08—2020,T/SAS0006—2020 2qRT-PCR：荧光反转录-聚合酶链反应（QuantitativeReverseTranscription-PolymeraseChainReaction） DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid） PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction） RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid） Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase） UDG酶：尿嘧啶DNA-糖基酶（UracilDNAGlycosylase） SARS-CoV-2：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus 2） 4检测原理 严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸qRT-PCR检测采用PCR扩增和荧光探针相 结合的方法，针对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2的高度保守序列，合成特异性引物和特异性的荧 光双标记探针。探针的5’端标记荧光素基团，3’端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，特异性引物和 探针与靶序列结合，通过Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性，在延伸到荧光探针时，将其 切断，此时荧光素基团和淬灭基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生。通过对荧光信号的检测，实现 对样本中SARS-CoV-2核酸的定性检测。 5实验前准备 5.1实验室分区 实验室分区应按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》中的实验室区域设计原则，包括 试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。各区仪器和耗材专用。 5.2试剂 5.2.1RNA提取试剂：可采用传统的Trizol法，也可采用其他等效提取