ICS 65.020.30 CCS B 41 团体 标准 T/SHZSAQS 00134—2022 绵羊FecB基因标记辅助选择育种 技术规程 2022- 10 -05发布 2022-10-05实施 石河子市质量标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00134—2022 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 3.1多羔 ................................ ................................ .............. 1 3.2 FecB基因 ................................ ................................ ......... 1 3.3标记辅助选择 ................................ ................................ ...... 1 3.4主效基因 ................................ ................................ .......... 1 3.5限制性内切酶 ................................ ................................ ...... 2 3.6限制性片段长度多态性 ................................ .............................. 2 4 主要试剂配制 ................................ ................................ ...... 2 5 主要仪器 ................................ ................................ .......... 2 6 FecB基因标记辅助选择育种方法 ................................ ...................... 2 6.1样本采集 ................................ ................................ .......... 2 6.2基因组DNA提取 ................................ ................................ .... 3 6.3基因组DNA质检 ................................ ................................ .... 3 6.4 PCR引物序列及引物配制 ................................ ............................ 3 6.5 PCR扩增体系 ................................ ................................ ...... 3 6.6 PCR扩增反应循环参数 ................................ .............................. 3 6.7 PCR产物的电泳检测 ................................ ................................ 3 6.8 RFLP酶切分析 ................................ ................................ ..... 3 6.9酶切产物电泳分析 ................................ ................................ .. 4 6.10基因分型结果的判定 ................................ ............................... 4 6.11标记辅助选择育种 ................................ ................................ . 4 7 废弃物的处理 ................................ ................................ ...... 4 8 人员防护措施 ................................ ................................ ...... 4 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00134—2022 II 前 言 本文件参照 GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则 》给出的 规则起草。 本文件起草单位： 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 。 本文件主要起草人 ：杨华、杨永林、余乾、张宾、郑晶晶、张姁 。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00134—2022 1 绵羊FecB基因标记辅助选择育种 技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊 FecB基因标记辅助选择育种的术语与定义及主要试剂配制、主要仪 器、 FecB基因标记辅助选择育种方法、废弃物的处理、人员防护措施等。适用于绵羊 FecB 基因标记辅助选择育种 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日 期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包 括所有的修改单）适用于本文件 。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 31190 实验室废弃化学品收集技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义 和缩略语 适用于本 文件。 3.1 多羔 指母羊一胎分娩出两只或两只以上的羔羊 。 3.2 FecB基因 是骨形态发生蛋白 IB型受体（ BMPR-IB）基因A746G位点碱基突变 的B等位基因 ，该基因 是绵羊多羔主效基因，存在 BB、B+和++三种基因型， 对绵羊排卵率 呈加性效应，对 胎产羔 数呈部分显性效应。 与低繁殖力绵羊品种相比， BB基因型母羊平均每胎多产 1.5只羔羊； B+ 基因型母羊平均每胎多产 1.0只羔羊； ++基因型母羊的产羔数与低繁殖力绵羊品种相同。 3.3标记辅助选择 指利用与目标性状紧密连锁的 DNA分子标记对目标性状进行间接选择的育种技术 。 3.4 主效基因 指对某一数量性状或阈性状的表型值产生较大遗传效应的单个基因或基因座。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00134—2022 2 3.5 限制性内切酶 全称限制性核酸内切酶，是一 类能够识别并附着双链 DNA分子中特定脱氧核苷酸序列， 并由此切割 DNA双链磷酸二酯键的一类酶。 3.6 限制性片段长度多态性 简称RFLP分析，指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点 上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起。 4 主要试剂配制 4.1 2%EDTA抗凝剂：称量 2gEDTA·Na2加入90ml去离子水中，溶解以后调 pH至7.0，加水定 容至100ml，溶液经高压灭菌，分装至无菌的 1.5ml～2ml离心管中， -20℃保存备用。 4.2 50×TAE电泳缓冲液（ pH8.5）：称量242gTris和37.2gNa2EDTA·2H 2O至1L烧杯中，向烧 杯中加入约 800ml去离子水，充分搅拌溶解。加入 57.1ml醋酸，充分搅拌。补加去离子水将 溶液定容至 1L后，室温保存。 4.3 1×TAE电泳缓冲液：量取 20ml50×TAE电泳缓冲液，加 980ml去离子水，充分混匀备用。 4.4 50ml琼脂糖凝胶： 根据制胶量及凝胶浓度，称量琼脂糖粉， 置于200ml 三角烧瓶中， 加入50ml1×TAE电泳缓冲液，混匀。将三角烧瓶放入微波炉里 (或电炉上 )加热3min～5min， 当溶液沸腾，取出摇晃混匀，重复 2次～3次使琼脂糖充分熔化。待溶液冷却至 60℃左右， 加入适量核酸染料，混匀