ICS 65. 020. 30 CCS B 43 DB61 陕西 瀘省地 方标准 DB 61/T 367.4—2022 代替DB61/T367.8-2002 荷斯坦牛生产技术规范 第4 部分：胚胎移植 Technical specification of production for Holstein- Part 4: Embryo transfer 言息服务平台 2022 - 08 - 24 发布 2022-09-24实施 陕西省市场监督管理局 发布 DB61/T 367.42022 目 次 前言. II 范围. 2 规范性引用文件 3 术语和定义， 供体和受体的选择 5 供体超数排卵和受体同期发情 6 供体母牛的发情鉴定和配种. 胚胎采集 抹胚与质量鉴定 9 胚胎的保存 10胚胎移植 附录A（资料性） 二步法玻璃化冷冻， ..5 附录B（资料性） 胚胎移植器操作步骤. 地方标准 DB61/T367.4—2022 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件为DB61/T367-2022《荷斯坦牛生产技术规范》的第4部分。DB61/T367-2022已发布了以下 文件： 第1部分：牛场建设 第2部分：良种登记 第3部分：人工授精与妊娠诊断 第4部分：胚胎移植 第5部分：特牛饲养管理 第6部分：育成牛饲养管理 第7部分：青年牛饲养管理 第8部分：泌乳牛饲养管理 第9部分：干奶牛饲养管理 第10部分：青贮玉米制作与使用 第11部分：牛场环境控制与无害化处理 第12部分：机械挤奶 第13部分：传染性疫病防治 第14部分：寄生虫病防治 第15部分：营养代谢病防治 第16部分：肢蹄病防治 第17部分：乳房炎防治 第18部分：公牛育肥 本文件代替DB61/T367.1～23-2005《荷斯坦牛标准综合体规划》第8部分，与DB61/T367.8-2005相 比，除结构和编辑性改动外，主要技术变化如下： 标准 标准名称修改为：《荷斯坦牛生产技术规范》第4部分胚胎移植。 增加了规范性引用文件GB/T5458、GB/T25881、GB/T35568、NY/T1445，删除了规范性引 用文件中《种畜禽管理条例》和地方标准的引用（见内容2）。 删除了标准中“3术语和定义”条款中的内容（见内容3）。 将原标准中“4胚胎移植的基本原则"修改为"4供体和受体的选择”。 将原标准中“4.1胚胎移植前后所处环境的同一性”和“4.4供体、受体的状况”的内容修改为“4.1 供体的选择”和“4.2受体的选择”（见内容4、4.1、4.2）。 -将原标准中“5胚胎移植的技术程序”修改为“5供体超数排卵和受体同期发情”，删除了原标准 中“5.2.2用药方式"的内容，增加了5.2供体超数排卵”和“5.3受体同期发情”的条款和内容，将原标准 9 胎的抹出与鉴定”、“5.7胚胎的保存”、“5.8胚胎的移植”、修改为“7胚胎采集”、“8抹胚与质量鉴定”、 “9胚胎的保存”、“10胚胎的移植”等内容（见内容5、6、7、8、9、10） 增加了“附录A"和“附录B"条款和内容（见附录A、B）。 本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。 II DB61/T 367.42022 本文件起草单位：西北农林科技大学、杨凌职业技术学院、现代牛业生物技术与应用国家地方联合 工程研究中心。 本文件主要起草人：林森、王国华、辛亚平、田万强、李炳志。 本文件由西北农林科技大学负责解释。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： -2005年首次发布为DB61/T367.8-2005； -本次为第一次修订。 联系信息如下： 单位：西北农林科技大学 电话：029-87091148 地址：陕西省杨凌示范区邰城路3号 邮编：712100 地方标准 III 地方标准 DB61/T 367.4—2022 荷斯坦生生产技术规范第4部分：胚胎移植 1范围 本文件规定了荷斯坦牛在胚胎移植操作过程中的技术要求。 本文件适用于荷斯坦牛的胚胎移植。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T3157 中国荷斯坦牛 GB/T5458 3液氮生物容器 GB/T 25881 1牛胚胎 GB/T35568 3中国荷斯坦牛体型鉴定技术规程 NY/T 1445 奶牛胚胎移植技术规程 3 ：术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 地方标准 4供体和受体的选择 4.1供体的选择 4.1.1应选择系谱清楚，综合评定指数或育种值高的母牛。 4.1.2具有良好的繁殖能力，既往繁殖史正常、易配易孕、没有遗传缺陷、分娩顺利的经产牛，年龄 在3 岁～6 岁之间。 4.1.3健康无疾、饲养条件稳定、体质健壮及情符合GB/T35568的规定。 4.2受体的选择 4.2.1受体母牛可选用非优良品种的个体，健康无疾、繁殖性能良好、体格较大、骠情中等、无难产 史等。 4.2.2 选择与供体发情同期的母牛，二者发情同步差不宜超过24h。 ，供体超数排卵和受体同期发情 1 DB61/T 367.42022 5.1药物选择 根据激素的不同功能，选择FSH（促卵泡素）、PG（前列腺素及其类似物）、CIDR或CUE-MATETM （孕酮阴道栓）、GnRH（促性腺激素释放激素）、LH（促黄体素）等不同的激素产品对供体牛和受体牛 进行处理。 5.2供体超数排卵 5.2.1FSH+PG法 在发情周期（发情当天为0d）的9d～13d中的任何一天开始肌注FSH。以递减剂量连续肌注4d， 剂量按总剂量200mg～400mg（进口激素）或300IU～500IU（国产激素）的40%：30%：20%： 10%进行注射。每天注射2次（间隔12h），总剂量按牛只体重、胎次作适当调整。在第一次注射FSH 后48h及60h，各肌注一次PG，每次0.4mg～0.6mg，若采用子宫灌注剂量可减半。 5.2.2CIDR?（CUE-MATET"）+FSH+PG 法 任意一天（发情日除外）放入CIDR（CUE-MATETM），第5d开始递减注射FSH连续4d，剂量按 总剂量200mg～400mg（进口激素）或300～500IU（国产激素）的40%：30%：20%：10%进行 注射。与第4针间隔12h后注射第5针，间隔12h后注射第6针，每次注射PG0.4mg～0.6mg，注射第6针 同时取出CIDR（CUE-MATETM）。配种前12h注射GnRH200μg，16d回收胚胎。 5.3受体同期发情 5.3.1PG法 5.3.1.1一次注射法：对受体牛在发情周期的任意一天（除发情当日外）直肠检查，只对卵巢上有黄 体的一次性注射PG0.4mg～0.6mg，在注射PG后24h～96h查情。 5.3.1.2两次注射法：在受体牛发情周期的任意一天（除发情当日外），不论卵巢上有无黄体，先注 射PG一次0.4mg～0.6mg，间隔11d～14d再用等量注射一次，在第二次注射后24h～96h内观察发 情。 5.3.2CIDR?（CUE-MATE"）+PG法 孕酮阴道栓置入阴道内，以置栓之日为0d，在第7d一次性肌注PG0.4mg～0.6mg，第9d取出CIDR （CUE-MATETM），或在第8d撤栓的同时注射PG0.4mg～0.6mg。 Benzoate，EB，苯甲酸雌二醇）2mg；第7d再次注射PG0.4mg～0.6mg，第8d撤栓，同时再次肌注同等 剂量PG。不观察发情，在第16d～17d检查黄体状况。 5.3.4GnRH+PG 法 对受体牛不作黄体检查，第1d注射GnRH或类似物（Fertagy）100μg或促排3号（LHRH-A3）25μg 第7天肌注PG0.4mg～0.6mg，第9d再次肌注同等量的GnRH或类似物（Fertagy）或促排3号（LHRH-A3）。 不观察发情，在第16d检查黄体状况。 2 DB61/T367.42022 6供体母牛的发情鉴定和配种 应按DB61/T367.3-2022第3部分人工授精和妊娠诊断要求执行。 7胚胎采集 7.1采胚时间与方法 在供体牛发情配种后6d～7d，采用非手术法采集胚胎。 7.2采胚前的准备 将采胚供体牛牵入保定架内，呈前高后低姿势。于采胚前10min，在尾椎硬膜外注射2%利多卡因 洗和消毒。 7.3采胚 7.3.1操作者将手伸入直肠，清除粪便，检查两侧卵巢黄体数目。将冲胚管经子宫颈缓缓导入一侧子 宫角基部，由助手抽出部分不锈钢导杆，操作者继续向前推进冲胚管，到达子宫角大弯附近时，助手从 进气口注入12mL～25mL空气。气囊位置和充气量合适时，抽出全部不锈钢导杆。助手用注射器吸取 事先加温至37℃的冲胚液，从冲胚管的进液口推进，进入子宫角内，冲胚液的注入量由刚开始的20 mL～30mL逐渐加大到50mL。再将冲胚液连同胚胎抽回注射器内，如此反复冲洗和回收5次～6次。 7.3.2每次回收的冲胚液收入集胚器内，置于37℃的恒温箱或无菌检胚室内等待检胚。一侧子宫角冲 胚结束，按上述方法再冲洗另一侧子宫角。结束后，可向子宫内注入或肌注PG，也可注入抗菌素预防 感染。 8胚与质量鉴定 地方标准 8.1栋胚 在20℃～25℃的无菌操作室内，体视显微镜下从冲胚液中抹出胚胎。 8.2胚胎质量鉴定 按GB/T25881的要求执行。 9胚胎的保存 9.1鲜胚保存及运输 9.1.1鲜胚保存 将鲜胚保存液预热到37℃，倒入培养皿中。把合格的胚胎转移到鲜胚保存液里，