ICS 67.050 B 20 备案号： 天 DB12 津 市 地 方 标 准 DB12/T 650—2016 转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法 Screening method for genetically modified plant Cry1Ab/Cry1Ac test strip 2016-09-27 发布 2016-11-01 实施 天津市市场和质量监督管理委员会发布 DB12/T 650—2016 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由天津市农村工作委员会提出。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天 津市东丽区产品质量监督检验所。 本标准主要起草人：兰青阔、李亮、黄凤军、刘雪岩、赵新、宛煜嵩、易萌、陈锐、徐石勇。 本标准 2016 年 9 月首次发布。 2 DB12/T 650—2016 转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法 1 范围 本标准规定了转基因植物及其产品成分Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法的术语和定义、检测方法、结果判 断。 本标准适用于表达Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的转基因大豆MON87701，转基因玉米MON810、Bt11、 Bt176，转基因水稻TT51-1、克螟稻、科丰六号，转基因棉花MON531、MON15985等主要植物及其初 级加工产品中Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的试纸条筛查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与标记的 特异性单克隆抗体1结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和NC膜检测线上特异性单克隆抗体2 结合形成双抗体夹心复合物，并显色。如果样本中转基因作物含量大于5%，控制线（Control Line，简 称C）和检测线（Test Line，简称T）显色，结果为阳性；反之，控制线（C）显色，检测线（T）不显 色，结果为阴性。 4 仪器设备及试剂 4.1 仪器设备 匀浆器；天平；移液枪；振荡器；离心管等。 4.2 试剂 提取缓冲液；实验用水为重蒸馏水或符合GB/T 6682规定的一级水等。 5 方法步骤 5.1 样品的采集和预处理 使用离心管盖夹取或者打孔的方式，采集植物新鲜组织样品生长点附近约3 cm幼嫩组织100 mg-200 mg，置于2 mL离心管中。作物籽粒可使用铁钳夹碎，取较碎部分置于2 mL离心管中。 5.2 样品研磨 加1 mL纯水或提取缓冲液于离心管中，使用一次性研磨杵手工研磨或电钻研磨，确保上层液体体 积应至少占总体积三分之一。 3 DB12/T 650—2016 对于混合样品，应称重后使用大容量研磨仪器研磨至100目大小粉末，然后加入水或提取缓冲液。 5.3 涡旋震荡 在振荡器上用力震荡30 s-1 min，确保样品充分混匀。 5.4 试纸条检测 震荡后，静置1 min待固体物质沉淀分层，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管， 开始计时。 5.5 读取结果 5-10 min底色褪去后，将试纸条水平放置于观察者正面读取结果。 5.6 结果判断 测试结果分为阴性、阳性和无效三种。 阴性（—）：控制线C 显色，检测线Ｔ不显色； 阳性（＋）：控制线C 显色，检测线Ｔ显色肉眼可见； 无效：C 线未出现，可能操作不当或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏。在此 情况下，应重新测试。 _________________________________ 4