ICS 65.020.20 CCS B 05 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 3 0 5 5—2021 燕子花组培苗生产技术规程 2021 - 12 - 24 发布 黑龙江省市场监督管理局 2022 - 01 - 23 实施 发 布 DB23/T 3 0 5 5—2021 前 言 本文件依据 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省林业和草原局提出。 本文件起草单位：东北林业大学、逊克县新立林场、东宁市林业和草原局、中国建筑西南设计研究 院有限公司山东分院、国营明水县明水林场。 本文件主要起草人：王玲、赵蕊阳、叶王斌、梁国爽、刘泽宇、弓悦、任昆仑、王磊、闫蕾、吕汝 彤、史恭发、付海静、刘桂伶、杨娟、李凤仪、周晟、裴艳春。 I DB23/T 3055—2021 燕子花组培苗生产技术规程 1 范围 本文件规定燕子花（Iris laevigata Fisch.）组培苗生产的环境与设备消毒、培养基配制、外植体制备、 诱导培养、增殖培养、生根培养、练苗、移栽和生产档案。 本文件适用于燕子花组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 环境与设备消毒 4.1 接种室消毒 接种室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.6 的规定执行。 4.2 培养室消毒 培养室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.7 的规定执行。 4.3 超净工作台消毒 超净工作台消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.5 和 8.6 的规定执行。 4.4 接种器具消毒 接种器具按 NY/T 2306—2013 中 8.4 的规定执行。 5 培养基配制 5.1 母液配制 培养基母液配制按 NY/T 2306—2013 中 7.3 的规定执行。 5.2 培养基配制 1 DB23/T 3055—2021 5.2.1 培养基配方 培养基配方如下： a）诱导培养基：MS＋0.5 mg/L IBA＋1.5 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，固化 剂可采用9.0 g/L琼脂粉，培养基灭菌前调制pH 5.8～pH 6.0； b) 增殖培养基：MS＋0.5 mg/L IBA＋1.5 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，固化 剂可采用9.0 g/L琼脂粉，培养基灭菌前调制pH 5.8～pH 6.0； c）生根培养基：MS＋0.2 mg/L NAA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，固化剂可采用7.0 g/L琼脂粉，培养基 灭菌前调制pH 5.8～pH 6.0。 5.2.2 培养基配制方法 培养基配制方法按 NY/T 2306—2013 中 7.4 执行。 5.3 培养基灭菌及保存 培养基灭菌及保存方法按 LY/T 1882—2010 中 4.2 进行。 6 外植体制备 6.1 种子选择与层积 宜选取当年秋季采集的饱满种子。10 月下旬土壤结冻前（土壤温度＞0℃），将种子与湿沙按 1:3 体积比混合，种沙混合物含水量 60%～65%，装入编织袋埋藏在室外土壤中层积，埋藏深度为 20 cm～ 30 cm。60 d 后取出备用。 6.2 种子消毒 种子在稀释的洗涤剂水中浸泡 10 min，置于流水下冲洗 30 min，室温下清水浸种 24 h。在超净工 作台中，先用 75 %乙醇溶液消毒 10 s 后，用无菌水冲洗 3 遍，再用 2 %次氯酸钠溶液浸泡并震荡 25 min， 后用无菌水冲洗≥5 遍。 6.3 种子萌发 在超净工作台中，将消毒后的种子放入培养皿中（内垫一层用无菌水浸透的滤纸作发芽床），水深 应达种子厚度的 2/3，盖好培养皿盖放入培养室培养。培养室温度为 24℃～26℃、光照周期 16 h/d，光 照强度为 2000 Lux～3000 Lux。 6.4 外植体的获取 将发芽的种子继续培养≥10 d，在超净工作台中，选取长出2片～3片叶子的健壮幼苗，将叶子剪至 2 cm～3 cm、根部修剪至0.2 cm后，作为外植体备用。 7 诱导培养 外植体叶片向上，茎基部垂直接入不定芽诱导培养基中，深度 0.5 cm，培养 35 d～45 d，光照周 期 12 h/d～14 h/d、光照强度 3000 Lux～5000 Lux、培养温度 22℃～28℃，空气相对湿度 70%～80%。 8 增殖培养 将分化的不定芽单独切离下来接入增殖培养基中，培养 35 d～45 d，光照周期 12 h/d～14 h/d、 2 DB23/T 3055—2021 光照强度 3000 Lux～5000 Lux，培养温度 22℃～28℃，空气相对湿度 70%～80%。待形成芽丛，分割新 长出的不定芽，可按需求重复继代培养，继代次数应≤3 次。 9 生根培养 选取培养瓶中高度≥2 cm、生长健壮的丛生芽，单个分割后，将叶片修剪至 1.5 cm～2 cm，接种至 生根培养基中，光照培养≥30 d。光照周期 12 h/d～14 h/d、光照强度 3000 Lux～5000 Lux，培养温 度 22℃～28℃，空气相对湿度 70%～80%。 10 炼苗 组培苗高度 3 cm～4 cm，基部长出≥3 条、长 2 cm～3 cm 的新根时，将组培瓶盖打开，倒入无菌 水覆盖在培养基表面，在室内敞口炼苗 3 d 后，取出组培苗，用清水冲干净根部残余培养基，修剪不健 康的根和枯黄的叶片，放入水中水培 20 d。 11 移栽 11.1 移栽准备 将草炭土和蛭石按体积比 3:1 混合，装入 50 孔的穴盘中，压实。穴孔的尺寸为 540 mm×280 mm。 将穴盘浸入 0.5 g/L 的多菌灵溶液中消毒备用。 11.2 移栽方法 取出水培的组培苗，轻度修剪不健康的根和枯黄的叶片，移栽至育苗盘中。 11.3 移栽后管理 移栽初期，保持空气湿度≥85%，适时浇水，保持基质湿润，温度控制在 18℃～25℃。生长期每 2 d～ 3 d 一次浇水。 12 生产档案 应建立生产档案，内容包括：环境与设备消毒、培养基配制、外植体制备、诱导培养、增殖培养、 生根培养、练苗和移栽等。 _______________________ 3