ICS 67.080 CCS B 31 湖 43 南 省 地 方 标 准 DB43/T 2343—2022 龙牙百合节本增效繁育技术规程 Technical regulation for saving cost and increasing efficiency propagation of seedlings of Lilium brownii Var. viridulum 2022 - 05 - 06 发布 2022 - 08 - 06 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB43/T 2343—2022 目 次 前言························································································································ Ⅲ 1 范围 ····················································································································· 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 3 术语和定义 ············································································································ 1 4 组培室条件 ············································································································ 1 5 培养基制备 ············································································································ 1 6 栽培基质 ··············································································································· 2 7 外植体消毒与选择 ··································································································· 2 8 试管苗繁育 ············································································································ 2 9 废弃物处理 ············································································································ 3 10 档案管理·············································································································· 3 附录 A（资料性） MS 培养基成分表 ··············································································· 4 附录 B（资料性） ········································································································ 5 I DB43/T 2343—2022 II DB43/T 2343—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南农业大学、湖南省蔬菜研究所、洪江市白芨药材种植专业合作社。 本文件主要起草人：陈海霞、周晓波、蒋辉、李玉帆、王建国、王茯苓、王登辉。 III DB43/T 2343—2022 IV DB43/T 2343—2022 龙牙百合节本增效繁育技术规程 1 范围 本文件确立了龙牙百合（Lilium brownii Var. viridulum Baker）节本增效繁育技术的组培室条件、培 养基制备、外植体选择与处理、种苗繁育、废弃物处理与档案管理。 本文件适用于龙牙百合节本增效繁育。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 DB15/T 1611—2019 细叶百合组织培养技术规程 DB43/T 215.2—2019 地理标志保护产品 龙牙百合 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 组培室条件 植物组织培养室应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间和驯化室。 组培所需设备有：冰箱、天平、酸度计、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器、超净工作台、 灭菌接种仪、接种器械、日光灯照明的培养架、自动控时器、空调、温湿度计、除湿机等。 5 培养基制备 5.1 培养基配方 5.1.1 诱导培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+食用白砂糖 30g/L+琼脂 7g/L，调整 pH 为 5.8。 5.1.2 增殖培养基：MS+1.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+食用白砂糖 30g/L+琼脂 7g/L，调整 pH 为 5.8。 5.2 培养基母液及培养基配制 按照附录 A 依次取 MS 母液，培养基的制作按照 DB15/T 1611—2019 执行。 5.3 培养基灭菌及保存 5.3.1 灭菌 将已封口的培养瓶放入高压灭菌锅内，121 ℃灭菌 15 min -20 min。灭菌完成后，待灭菌锅内气 1 DB43/T 2343—2022 压表降至 0 时取出，并置于接种室自然冷却。 5.3.2 保存 灭菌后的培养基，贮存时间不超过 10 d。 5.4 培养条件 培养温度 25 ℃±1 ℃，光照强度 2500 Lx，每天光照时间 10 h-12 h。 6 栽培基质 6.1 生根培养基质 以清洁的河沙为基质，用 1‰-2‰高锰酸钾溶液对基质进行消毒处理，种植前再使用 0.1％多菌灵 溶液喷施基质表面，覆膜保持适宜的湿度。 6.2 移栽基质 混合基质配方为珍珠岩∶蛭石∶泥炭土=1∶1∶1。 7 外植体消毒与选择 7.1 外植体选择 选择生长健壮、个大、座高、片长肉厚、无病虫害、无机械损伤的脱毒商品球为繁育母种球。 7.2 外植体消毒 将龙牙百合商品球的所有鳞片依次剥下，放入烧杯中，流水冲洗干净后用蒸馏水浸泡 10 min，用 已经配制好的 3-5％次氯酸钠在超净工作台上再浸泡 15 min，然后用无菌水洗 3 次-5 次，取出后用无 菌滤纸吸干鳞片表面水分。 7.3 外植体切段 将消毒完成的龙牙百合鳞片横切，切成 1 cm 长的鳞片段，备用。 8 试管苗繁育 8.1 诱导培养 将处理完成的鳞片段，接入诱导培养基，每瓶接 2 个-4 个外植体，均匀分布，封好瓶口后，注明 代号及日期等，放至培养室培养 30 d-40 d。 8.2 增殖培养 将已经诱导培养出来的丛生芽切成单芽，接种到增殖培养基中，每瓶接种 2 个-4 个单芽，培养 40 d。 8.3 炼苗 当龙牙百合无根苗的小鳞茎直径约 1cm 时，将组培瓶置于无强烈直射光的炼苗室内炼苗 4 d。 2 DB43/T 2343—2022 8.4 瓶外生根 将炼苗完成后的无根组培苗从瓶内取出，洗净残留的培养基，在 300 mg/L NAA 溶液中浸泡 15 min 后，移栽到河沙基质中，湿度控制在 80％-90％，温度以 20 ℃-25 ℃为宜，适度遮阴，培养 30 d。 8.5 移栽 当幼苗生长至 3 片-4 片真叶时移栽至混合基质，环境湿度控制在 80％-90％，温度以 20 ℃-25 ℃ 为宜，并适度遮阴；14 d 后，每 7 d 喷施一次 1/2MS 培养基溶液。 8.6 出苗 当小鳞茎直径达 0.5 cm-1.0 cm 时即可出苗。 9 废弃物处理 繁育实验过程中产生的废弃物应集中收集，定点存放，存放地点必须张贴警告牌或告示，做到专人 负责管理。 10 档案管理 建立龙牙百合节本增效繁育技术基本情况档案，按照附录 B 记载龙牙百合材料来源、培养基配制、 诱导培养、增殖培养、瓶外生根培养和移栽等主要繁育过程技术内容，档案由组培人员填写，档案填写 后，及时整理归档。 3 DB43/T 2343—2022 附 录 A （资料性） MS 培养基成分表 表 A.1 MS 培养基成分表 名称 大量元素母液 （20 倍） 微量元素母液 （200 倍） 铁盐母液 （200 倍） 有机成分母液 （200 倍） 4 成分 贮备液配制浓度（mg/l） KNO3 38000 NH4NO3 33000 KH2PO4 3400 MgSO4·7H2O 7400 CaCl2·2H2O 8800 KI 166 H3BO3 1240 MnSO4·4H2O 4460 ZnSO4·7H2O 1720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 Na2-EDTA 7460 FeSO4·7H2O 5560 肌醇 20000 烟酸 100 盐酸吡哆醇 100 盐酸硫胺素 20 甘氨酸 400 每升培养基取用量（ml） 50 5 5